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Teste confiável de anticorpos para SARS-CoV-2



Crédito da imagem: Shutterstock / Dotted Yeti

Nesta entrevista, Poncho Meisenheimer, VP de P&D da Promega, fala ao News-Medical Life Sciences sobre a importância de se ter a confiabilidade para os testes de anticorpos SARS-CoV-2.

Você pode nos dar uma breve introdução aos testes do anticorpo SARS-CoV-2 e a importância de sua confiabilidade?

Um teste de anticorpos SARS-CoV-2 , ou teste sorológico, é usado para detectar anticorpos que são produzidos pelo seu sistema imunológico em resposta a uma ameaça, como um vírus específico. Esses exames de sangue podem fornecer um histórico de infecção em indivíduos, monitorar a prevalência da doença com base na população, avaliar o estágio da doença e orientar o desenvolvimento da vacina.

Um teste de anticorpos com alta sensibilidade (concordância percentual positiva - PPA) significa que o ensaio gerará um número menor de resultados falsos negativos, o que é importante quando esses testes são usados ​​para identificar pessoas previamente infectadas. Os falsos negativos apresentam vários riscos, incluindo a falta de isolamento ou proteção do paciente, que pode levar a uma maior disseminação, prescrição de tratamentos terapêuticos inadequados e imprecisões no rastreamento de contatos e estudos de vigilância.

Crédito da imagem: Shutterstock / Dotted Yeti

Qual é a diferença entre RT-PCR e testes de anticorpos ?

O teste baseado em PCR é usado para identificar uma infecção SARS-CoV-2 ativa em indivíduos, detectando diretamente a presença do material genético do vírus (RNA). Enquanto o teste de anticorpos é usado para identificar a resposta imune do nosso corpo a uma infecção ativa ou passada do vírus SARS-CoV-2. O desenvolvimento de testes específicos e sensíveis de ambos os tipos é fundamental.

Em termos de detecção de anticorpos, qual o papel da gravidade da doença?

Em amostras de pacientes, descobriu-se que a resposta de anticorpos varia com diferentes manifestações clínicas e gravidade da doença 1-7 . Relatórios de dados de vários estudos de pesquisa demonstram que muitos pacientes com sintomas graves relacionados a COVID-19 produzem níveis mais elevados de anticorpos do que pacientes com doença leve a moderada durante um período de tempo semelhante. Portanto, a sensibilidade (PPA) de um teste de anticorpos é frequentemente maior em pacientes hospitalizados, que são mais propensos a ter sintomas mais graves como resultado do vírus.

Qual é o conceito e a tecnologia subjacente ao Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2?

Usando nossa nova tecnologia Lumit ™ , desenvolvemos um teste IVD qualitativo destinado a detectar anticorpos para SARS-CoV-2. imunoensaio Lumt ™ Dx é composto por dois fragmentos de proteína - uma parte da proteína específica do SARS-CoV-2 e a outra parte uma subunidade da NanoBiT® Luciferase (SmBiT ou LgBiT). Na presença de soro ou plasma contendo anticorpos para SARS-CoV-2, os fragmentos de proteína são atraídos para uma estreita proximidade pelo anticorpo para formar uma enzima luminescente ativa.

Em termos de teste de anticorpos para SARS-CoV-2 , quais são alguns dos pontos fortes por trás dessa abordagem?

Além de ser rápido e simples, as interações de ligação do nosso ensaio ocorrem em uma solução homogênea. Esta é uma grande melhoria em relação às interações heterogêneas com anticorpos que são típicas de ensaios ELISA, que podem levar a interferência de fundo devido a anomalias nas interações de superfície.

Por outro lado, quais são algumas das principais limitações e implicações dos testes de anticorpos ?

No momento, a verdadeira utilidade clínica dos testes de anticorpos para SARS-CoV-2 está sendo ativamente estudada. Os pesquisadores ainda não sabem se a presença de anticorpos indica que um indivíduo está imune a um vírus no futuro. Eles também não sabem exatamente quanto tempo os anticorpos realmente duram no corpo ou se induzimos respostas de anticorpos de longo prazo após a reinfecção com o vírus.

Em que você diria que o Imunoensaio Lumit ™ Dx difere de outros métodos de detecção de anticorpos (como métodos convencionais de ELISA)?

Os métodos convencionais de ELISA envolvem várias etapas de incubação e lavagem, muitas vezes levando a dados inconsistentes, incluem várias etapas de anticorpos e detecção, muitas vezes diminuindo a especificidade e aumentando o ruído de fundo, e podem levar horas para obter resultados.

Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2 elimina a necessidade de todas as lavagens, reduzindo o protocolo a apenas algumas etapas simples. Isso significa menos tempo prático, permitindo que um laboratório avance pelo fluxo de trabalho mais rapidamente e passe da amostra aos resultados em menos de uma hora. O fluxo de trabalho não requer placas especializadas ou um investimento em grandes equipamentos de laboratório, mas apenas um leitor de microplacas com capacidade luminescente. Além disso, o ensaio pode ser facilmente automatizado na maioria dos principais manipuladores de líquidos para acomodar o teste de grandes conjuntos de amostras. Nossos especialistas de suporte de campo têm experiência científica, técnica e programática para trabalhar com plataformas de manipulação de líquidos desenvolvidas pela Promega (Maxprep TM ) e de terceiros e estão disponíveis para otimizar e oferecer suporte a qualquer fluxo de trabalho de laboratório.

Além disso, o Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2 detecta anticorpos humanos contra o antígeno do Domínio de Ligação ao Receptor (RBD) dentro da subunidade S1 da proteína SARS-CoV-2 Spike (S), ao contrário de muitos testes de anticorpos no mercado que detectar anticorpos contra a proteína Nucleocapsid (N). A pesquisa demonstrou que a proteína Spike (S) pode oferecer melhor sensibilidade do que a proteína Nucleocapsid (N) para medir os anticorpos específicos para SARS-CoV-2 8 . Além disso, muitos pesquisadores demonstraram que os anticorpos produzidos contra a proteína Spike (S), muitos produzidos especificamente contra o domínio RBD, são capazes de neutralização viral e são direcionados nos esforços de tratamento e desenvolvimento de vacinas 9-14 .

Por fim, nossos dados foram gerados usando amostras reais da comunidade com um amplo espectro de gravidade da doença, que é mais representativo do que um laboratório de sorologia clínica observará ao testar “pacientes ambulatoriais”. Muitos testes de anticorpos no mercado hoje não estratificaram suas coortes de amostra dessa maneira para obter o desempenho clínico de seu ensaio.

Você pode nos contar como a Promega usou sua experiência em bioluminescência e como eles incorporaram a nova tecnologia de bioluminescência ao Lumit ™?

A Promega é pioneira em tecnologia bioluminescente desde 1990, começando com tecnologias baseadas em Firefly, então tecnologias baseadas em Renilla e mais recentemente nossas tecnologias baseadas em NanoLuc®. Ao contrário da fluorescência, a bioluminescência não é afetada pela sobreposição de comprimento de onda de excitação, produtos químicos fluorescentes na mídia e fluorescência de fundo.

tecnologia Lumit ™ permite a detecção baseada em bioluminescência de antígenos ou anticorpos específicos, simplificando os protocolos de imunoensaio e acelerando o tempo para os resultados. Com base em nosso premiado sistema de complementação 15-16 NanoBiT®, a tecnologia Lumit ™ capacita imunoensaios sensíveis e precisos para aplicações de pesquisa e diagnóstico.

Continuamos a aumentar nossa experiência neste espaço, identificando maneiras inovadoras e inovadoras de infundir nossas tecnologias bioluminescentes em várias aplicações para laboratórios de pesquisa, farmacêuticos e clínicos.

Qual é a estratégia por trás do uso de uma Coorte Comunitária para Desempenho Clínico e quais são alguns dos desafios que vêm junto com esse método?

Para testes de prevalência e triagem populacional, os testes de anticorpos podem ser usados ​​para identificar indivíduos que não foram hospitalizados e podem não ter tido uma infecção por SARS-CoV-2 conhecida. Além disso, o desempenho clínico de nossos ensaios mostra que a resposta de anticorpos pode aumentar com a gravidade dos sintomas. Por essas razões, optamos por coletar amostras de indivíduos da comunidade que se recuperaram de casos confirmados de COVID-19 (mas não necessariamente precisaram de hospitalização). Essa coorte representou um desafio porque os sintomas e o nível de infecção nesses indivíduos eram mais leves, o que provavelmente afetou a quantidade de anticorpos produzidos. Portanto, a vantagem de trabalhar localmente era que tínhamos amostras do mundo real que eram uma representação de uma comunidade típica,

Em termos de disponibilidade, onde o Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2 está disponível atualmente?

O imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2 está disponível nos Estados Unidos. Planejamos disponibilizar o ensaio na Europa e no Reino Unido no início de 2021. Também estamos explorando oportunidades de lançar o ensaio em outras partes do mundo, por isso incentivamos laboratórios para entrar em contato com a Promega para discutir como tornar isso possível.

Onde nossos leitores podem ir para saber mais?

Visite www.promega.com/AntibodyTest para saber mais sobre o Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2. Visite www.promega.com/LumitTechnology para saber mais sobre a tecnologia Lumit TM .

Sobre Poncho Meisenheimer

Poncho Meisenheimer é químico treinado e VP de P&D na Promega. Ele trabalhou por 19 anos no desenvolvimento de ferramentas de descoberta de medicamentos luminescentes e desenvolvimento de ensaios, mas ele é apenas uma mente em uma equipe cientificamente maior que desenvolveu o Imunoensaio Lumit ™ Dx SARS-CoV-2. À medida que a crise pública se estabiliza, todos esses membros da equipe retornarão ao desenvolvimento de ferramentas para doenças infecciosas, oncologia, produtos biológicos, análise celular e pesquisa em ciências biológicas.

REFERÊNCIAS:

  1. Zhao, J. et al. Respostas de anticorpos ao SARS-CoV-2 em pacientes com nova doença coronavírus 2019. Clinical Infectious Diseases , doi.10.1093 / cid / c8aa344 (2020).
  2. Lou, B et al. Características da sorologia da infecção por SARS-CoV-2 desde a exposição e o início dos sintomas. Eur Respir J , doi.10.1183 / 13993003.00763 (2020).
  3. Suhandynata, RT et al. Monitoramento longitudinal da soropositividade para SARS-CoV-2 IgM e IgG para detectar COVID-19. J Appl Lab Med , doi: 10.1093 / jalm / jfaa079.
  4. Liu, L. et al. Um estudo preliminar sobre ensaio sorológico para síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2) em 238 pacientes hospitalizados. Micróbios e infecção , doi: 10.1016.j.micinf.2020.05.008 (2020).
  5. French, MA & Moodley, Y. O papel dos anticorpos SARS-CoV-2 em COVID-19: Cura na maioria, dano às vezes. Respirology , doi: 10.1111 / resp.13852 (2020)..

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